基因型：

F- φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) LAMpir U169 endA1recA1 hsdR17(rk- ,mk+) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1phoA

簡要說明：

DH5α λpir 菌株來源于 DH5α，在 DH5α 大腸桿菌基因組中引入 LAMpir，即為 DH5α λpir，該菌株可以表達PIR 蛋白，使得含有 R6Kg ori 復制子的質粒可以在其中正常復制。 DH5α λpir 菌株缺失核酸內切酶 (endA)，提高了質粒 DNA 的產量和質量；重組酶缺陷型 (recA)減少插入片段的同源重組概率，保證了插入 DNA 的穩(wěn)定性； lacZΔM15 的存在使 DH5α 可用于藍、白斑篩選；但 DH5α λpir 菌株生長速度較慢，在平板培養(yǎng)或液體搖菌時應 延長生長時間。 DH5αλpir 感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19 質粒檢測轉化效率>1×109 cfu/μg DNA。

操作說明：

1.DH5α λpir 感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5 分鐘后待菌塊融化，加入目的 DNA（質?；蜻B接產物）并 用手打 EP 管底混勻，冰中靜置 25 分鐘。

2.42℃水浴熱激 45 秒，迅速放回冰上并靜置 2 分鐘，晃動會降低轉化效率。

3.向離心管中加入 700 μl 不含抗生素的無菌LB培養(yǎng)基，混勻后 37℃，200 rpm 復蘇 70 分鐘。

4. 5000 rpm 離心 1 分鐘收集菌體，留取 100 μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的 LB 培養(yǎng)基上。5. 將平板倒置放于 37℃培養(yǎng)箱至少 18 小時。

注意事項：

1.感受態(tài)細胞最好在冰中緩慢融化。插入冰中 8 分鐘內加入目標 DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降 低轉化效率

2. DH5α λpir 菌株生長緩慢，在平板上培養(yǎng)或液體搖菌時應延長菌體生長時間（37℃，18 小時以上）。

3. 轉化高濃度的質?；蚋咝实倪B接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。