基因型：

F′{lacIq Tn10 (TetR)} mcrA ?(mrr-hsdRMS-mcrBC)Φ80lacZ?M15 ?lacX74 recA1araD139?(ara-leu)7697 galUgalK rpsL endA1 nupG

簡要說明：

TOP-10F`菌株來源于TOP-10菌株。將F`{lacIq Tn10 (TetR)}因子轉(zhuǎn)入TO-P10菌株，即為TOP-10F`。該F`因子攜帶lacIq 抑制子，可抑制trc，tac，lac等啟動子下游基因的表達，從而可以用于一些表達毒性蛋白質(zhì)粒的擴繁。recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。 TOP-10F’可用于構(gòu)建克隆，藍白斑篩選（如用于藍白斑篩選，需在培養(yǎng)基中加入IPTG誘導(dǎo)β-半乳糖苷酶基因的表達）實驗，具有四環(huán)素抗性。 High5TM系列TOP-10F`感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率>108cfu/μg。

操作說明：

1.TOP-10F`感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手打EP管底輕輕混勻，冰中靜置25分鐘。

2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。

3.向離心管中加入700μl不含抗生素的2YT或LB無菌培養(yǎng)基，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。 

4.5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選，將平板放37℃培養(yǎng)至少13h。

注意事項：

1.感受態(tài)細胞最好在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標DNA，不可在冰中放置時 間過長，長時間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。

2.混入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物時應(yīng)輕柔操作。

3.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。